Настоящий

Том 13 научных докладов, Номер статьи: 9226 (2023) Цитировать эту статью

Подробности о метриках

Нарушение целостности гемато-ретинального барьера лежит в основе патологических изменений при многочисленных заболеваниях глаз, включая неоваскулярную возрастную дегенерацию желтого пятна (нВМД) и диабетический макулярный отек (ДМО). Несмотря на то, что терапия антиваскулярным фактором роста эндотелия (VEGF) произвела революцию в лечении заболеваний, новые методы лечения по-прежнему необходимы для удовлетворения неудовлетворенных потребностей пациентов. Чтобы помочь в разработке новых методов лечения, необходимы надежные методы измерения изменений проницаемости сосудов в тканях глаза на животных моделях. Мы представляем здесь метод определения проницаемости сосудов с помощью флуорофотометрии, который позволяет в реальном времени измерять накопление флуоресцентного красителя в различных отделах глаза мыши. Мы применили этот метод на нескольких моделях мышей с различной повышенной сосудистой утечкой, включая модели увеита, диабетической ретинопатии и хориоидальной неоваскуляризации (ХНВ). Кроме того, на мышиной модели CNV JR5558 мы наблюдали после обработки анти-VEGF продольное снижение проницаемости в тех же глазах животных. Мы пришли к выводу, что флуорофотометрия является полезным методом измерения проницаемости сосудов в глазу мыши и может использоваться в нескольких временных точках без необходимости приносить в жертву животное. Этот метод потенциально может быть использован как в фундаментальных исследованиях для изучения прогрессирования и факторов, лежащих в основе заболевания, так и для открытия лекарств и разработки новых терапевтических средств.

Утрата целостности гематобарьера, приводящая к отеку и последующему повреждению тканей, описана как фактор, способствующий развитию широкого спектра заболеваний, включая сепсис1, рак2 и инсульт3. В глазу сосудистая нестабильность и накопление жидкости в сетчатке и окружающих тканях являются центральным признаком некоторых из наиболее распространенных заболеваний, угрожающих зрению, таких как неоваскулярная возрастная дегенерация желтого пятна (нВМД) и диабетический макулярный отек (ДМО). что, если его не лечить, может привести к быстрой потере зрения4,5,6,7. Кроме того, глазные заболевания, такие как глаукома8 и увеит9, также связаны с повышенной проницаемостью сосудов, хотя для определения этой связи с этиологией заболевания могут потребоваться дальнейшие исследования.

Ингибиторы анти-VEGF, вводимые интравитреально, такие как ранибизумаб и афлиберцепт, стали стандартом лечения нВМД и ДМО10,11 и произвели революцию в результатах лечения пациентов со зрением, хотя эти заболевания продолжают оставаться основной причиной нарушений зрения12, поскольку не все пациенты реагируют на них. к лечению анти-VEGF, а у некоторых пациентов, несмотря на лечение, может продолжать наблюдаться утечка жидкости из сетчатки или субретинальной области или развиваться фиброз и атрофия. Чтобы помочь удовлетворить одну из этих неудовлетворенных потребностей, на рынок недавно вышло следующее поколение терапевтических средств, направленных на восстановление стабильности сосудов в глазу, таких как фарицимаб (VABYSMO; Genentech/F. Hoffmann-La Roche Ltd.), вызывающий рост эндотелия сосудов. биспецифическое антитело фактор (VEGF)-ангиопоэтин (Ang)-213,14,15.

Разработка новых методов лечения, способных предотвратить патологическую утечку из глазных сосудов, продолжается по мере развития нашего понимания этих заболеваний. Чтобы помочь в разработке этих новых методов лечения, необходимы доклинические модели и соответствующие методы, которые позволяют отслеживать изменения проницаемости сосудов с течением времени. Современные методы определения проницаемости включают синий Эвана16,17, флуоресцеинизотиоцианат (FITC)-декстран18 и методы перфузии микросфер19, а также методы визуализации, такие как флюоресцентная ангиография20,21 и экзогенная оптическая когерентная томография с утечкой контраста (ОКТ)22. Хотя многие из этих методов хорошо зарекомендовали себя, они также могут иметь некоторые проблемы и недостатки, которые более подробно обсуждаются в другом месте20. Описанный здесь метод также может использоваться в сочетании с существующими методами.

Флюорофотометрия — универсальный инструмент, который уже давно используется как в клинических, так и в доклинических исследованиях глаз23,24. Приборы-флуорофотометры были разработаны для измерения концентрации флуорофоров в тканях глаза25 и, таким образом, могут использоваться для определения диффузии и выведения эталонного красителя, чтобы обеспечить представление о физиологическом состоянии глазной сосудистой сети. Инструменты флюорофотометрии были доступны для глазных применений, таких как измерение потока водной жидкости, фармакокинетика лекарств, образование слезной пленки и утечка из сосудов у человека26, крыс27,28 и других видов29,30, но до относительно недавнего времени31 это было невозможно на мышах из-за ограничений от размера глаза. В этой статье мы рассматриваем использование новой доступной технологии для измерения проницаемости сетчатки, стекловидного тела и передней камеры. Мы пытаемся проверить эту технологию на животных моделях глазных заболеваний, а также предоставить пример того, как ее можно использовать для измерения проницаемости стекловидного тела после лечения анти-VEGF, чтобы продемонстрировать ее потенциал в разработке терапевтических средств. Эти результаты показывают, что флуорофотометрию можно использовать для мониторинга и количественной оценки изменений сосудистой утечки в глазу мыши, что также можно использовать наряду с другими существующими методами.